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大肠杆菌宿主菌株 E.coli

BL21(DE3) △ spr 抗自溶大肠杆菌宿主菌

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BL21(DE3) △ spr 抗自溶大肠杆菌宿主菌

产品介绍



大肠杆菌spr基因(SPR_ECOLI,UniProtKB/Swiss-Prot P0AFV4)编码一种18kDa的膜结合细胞周质蛋白酶,该蛋白酶是Tsp(也称为Prc)蛋白酶和外膜中参与细胞分裂的肽聚糖的底物。大肠杆菌BL21(DE3)基因组中敲除了spr基因,能够有效降低高密度发酵过程中的早期自溶现象。

功能与调控机制

spr基因在1996年由Hara等人首次发现,当时他们分离了Tsp缺陷菌株的耐热性回复突变株,这些突变株含有spr基因突变。研究发现,spr蛋白能够抑制携带prc突变体的菌株所表现出的生长表型,这表明spr在蛋白酶调控网络中发挥重要作用。

应用价值

spr基因在重组蛋白生产领域具有重要应用价值。研究发现,ΔDegP、Δprc和spr W174R突变的三重组合能够提供最高水平的抗体轻链、抗体重链及F(ab')2-LZ等重组蛋白的表达。这种组合突变的大肠杆菌菌株在细胞周质中能够实现重组抗体片段的高水平积累,显著提高外源蛋白的产量。

突变位点

spr基因的174位色氨酸(W174)是一个关键突变位点,将其突变为精氨酸或赖氨酸(sprW174R)能够有效降低Tsp蛋白酶活性,从而提高重组蛋白的稳定性。此外,在N31、R62、I70、Q73、C94、S95、V98、Q99、R100、L108、Y115、D133、V135、L136、G140、R144、H145、G147和H157等氨基酸位点的突变也被证明能够降低Tsp活性,为重组蛋白生产提供了多种优化策略


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