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乳酸菌载体 lactic acid bacteria vector

乳酸杆菌整合型载体pIlac

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乳酸杆菌整合型载体pIlac

产品介绍

王红梅等用PCR从短小乳酸杆菌染色体中扩增得到S-层蛋白的信号肽序列,将其与hCGβ基因连接后克隆到乳酸杆菌整合型表达载体pIlac的lac启动子下游,得到质粒pIlac hCGβ电穿孔转化Lb.caseiCECT5276。在含红霉素培养基中培养,挑选转化后的耐药菌落,抽提其染色体DNA,PCR 及测序鉴定证实hCGβ基因整合到Lb.casei的基因组中,细菌产生的目的蛋白约有3/4分泌进入培养上清,而加入诱导剂乳糖21 h后,上清中的蛋白浓度达到峰值,为440 mIU/mL。重组菌在无选择压力条件下培养50代后仍可分泌hCGβ。在获得稳定、分泌性表达的hCGβ菌株后,接种于8周龄BALB/C雌性小鼠的阴道粘膜。于免疫后2周取阴道洗液,放免法检测hCGβ水平,间接ELISA检测抗hCGβIgA抗体水平。阴道洗液中的抗hCGβIgA抗体OD值为0.297,明显高于阴性对照组(P <0.O1),而与DNA免疫组无显著性差异(P >0.05)。结论表明hCGβ在Lb.casei CECT5276中得到了稳定的分泌性表达。
重组hCGβ乳酸杆菌可在阴道粘膜局部定居,并通过粘膜免疫在局部刺激产生抗hCGβIgA抗体。hCGβ疫苗是第一个进入临床试验的避孕疫苗。其

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