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诱导型质粒表达

分选酶Sortase介导的大肠杆菌表面展示系统,可以自催化纯化蛋白。

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分选酶Sortase介导的大肠杆菌表面展示系统,可以自催化纯化蛋白。

产品介绍

利用 pET15b 载体( Novagen) 在大肠杆菌中表达融合蛋白,融合蛋白由 N 端的 组氨酸标签、SrtA、LPETG 分选基序以及靶蛋白组 成。由于含有组氨酸亲和标签,重组蛋白可以很 容易地通过金属离子亲和层析( IMAC) 吸附,进行 高效率的纯化,然后将 Ca 2 + 加到亲和柱上激活 SrtA 的催化作用,分选酶将在 LPETG 分选基序的 Thr-Gly 处切割,从亲和柱上释放出仅在 N 端含有 一个 Gly 残基的靶蛋白 。利用这一系统在 大肠杆菌中进行了 eGFP、p21 和 Cre 蛋白的表达 和纯化,StrA 的融合表达促进了以上蛋白质的表 达,最终回收的靶蛋白纯度高达 98% 以上。

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