焦磷酸酶

质粒/菌株

质粒改造
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工程菌菌株
质粒菌株资料

产品编号	产品名称
	焦磷酸酶

产品介绍

真核生物中mRNA经转录后修饰在5′端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对 mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，能显著提高体外转录的RNA的稳定性和翻译能力。的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

产品特点：
本产品在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，效率可达到100%，并且保证加帽方向正确。

质量保证：
1、SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；
2、酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染；
3、光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。

产品用途：
1、可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应；
2、可应用于mRNA的5’末端标记反应。

纯度验证

RNA酶残留定量检测

应用实例
【加帽反应】
适用于10gRNA (>I00nt)的加用反应，反应体系20L,且可根据实际需要放大。
1.取10gRNA,用 RNase free water将适量 RNA稀释至15L；
2.将RNA置于65℃加热5min,结束后冰上放置5 min；
3.按照表格依次加入各组分；
4.37℃反应30 min.
5.RNA加帽完成，可进行后续实验.

应用实例
【5′末端标记反应】
本步骤适用于5′末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中RNA与 GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1.用RNase Free Water将适量RNA稀释至 14L；
2.将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min；
3.按照表格依次加入各组分：
4.37℃孵育30 min；
5.RNA5′端标记完成，可进行后续实验。
*注：GTPMix为GTP和少量标记物，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。