实验原理

利用瞬间高压造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，有利于 DNA 等大分子进入。因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。电转化效率高，成功率可以达到109 ～ 1010 转化子/ug DNA。

实验材料

大肠杆菌，LB固体培养基，LB培养液，10%甘油（高压灭菌）等
冷冻离心机，电转仪，移液器，恒温培养箱，摇床

实验过程

一、电转感受态细胞制备
1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜；
2．取 2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6（约2.5-3小时）；
3．将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作；
4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟；
5．4℃下3000g冷冻离心5分钟；
6．弃去上清，加入 1500μl冰冷的10%甘油，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；
7．4℃下3000g冷冻离心5分钟；
8．弃去上清，加入 750μl冰冷的10%甘油，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；
9．4℃下3000g冷冻离心5分钟；
10．加入 20μl冰冷10%的甘油，用移液器轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；
11．立即使用或迅速置于 -70℃超低温保存。

二、质粒电转化感受态细胞
1．制备选择性培养基平板：在融化的 250ml LA 培养基中加入 250μl Amp （100mg/ml）, 250μl X-gal (20mg/ml), 25μl IPTG (200mg/ml), 混匀后倒入灭菌培养皿中；
2．取出制备好的感受态细胞，放在冰上融化；
3．每管感受态细胞加入 1μl 连接产物，用移液器轻轻吸打均匀，置冰上；
4．电转化仪选择 1800V 作为输出电压；
5．将要转化的混合物加入预冷的 1 mm 的电转化杯中，立即按下按纽电击；
6．立即加 1ml SOC 培养基到转化杯中重悬细胞；
7．将细胞转入合适的培养管中37℃培养 1 小时；
8．吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板；
9．37℃培养过夜，观察结果。